一、基本信息

1. 产品编号：HY-C142

2. 产品名称：BV2-Cas9（小鼠小胶质细胞 Cas9 工具株）

3. 英文名称：BV2-Cas9 Mouse Microglia Cas9 Stable Cell Line

4. 细胞别称：BV2-CAS9、BV2 Cas9 稳转株、小鼠小胶质细胞 Cas9 工具株

5. 种属来源：小鼠（C57BL/6 背景，按公开建系资料补充）

6. 组织来源：脑（小胶质细胞）

7. 疾病背景：正常细胞（永生化小胶质细胞系）

8. 细胞类型：Cas9 稳定表达工具细胞系

9. 宿主细胞：BV2（经典永生化小鼠小胶质细胞系）

10. 构建方式：Cas9 基因稳定整合（持续表达 Cas9 核酸酶，导入 sgRNA 即可实现高效基因敲除）

11. 细胞形态：圆形/阿米巴样（激活态呈伸展形态），半贴壁生长

12. 生长特性：半贴壁生长

13. 细胞规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管

14. 传代代数：10代以内

15. RRID：—（以引种证书为准）

16. 保藏机构：—（经典细胞系，见引种证书）

17. 生物安全等级：BSL-1

18. 质量检测：STR 鼠源鉴定正确，支原体检测阴性；Cas9 表达与切割活性验证（按种子批报告）

二、细胞特征

1. 背景介绍：BV2 是由新生 C57BL/6 小鼠小胶质细胞经 v-myc/v-raf 永生化建立的经典细胞系——神经炎症研究中使用最广泛的小鼠小胶质细胞模型：LPS 刺激可稳定诱导 NO、TNF-α、IL-1β、IL-6 等炎症因子释放，广泛用于阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性疾病的炎症机制研究与抗炎药物筛选。

2. Cas9 工具株价值：本细胞株在 BV2 背景上稳定表达 Cas9 核酸酶——导入 sgRNA（质粒/病毒/RNP）即可实现高效基因敲除，省去 Cas9 质粒共转与筛选，特别适合小胶质细胞激活/极化（M1/M2）相关基因的高通量功能筛选与神经炎症信号通路研究。

3. 形态与功能特性：静息态圆形、激活态阿米巴样伸展——形态学可直接反映小胶质激活状态；吞噬与炎症反应功能保留，适合共培养与功能实验。

三、培养条件

1. 基础培养基：DMEM 高糖

2. 培养基配方：89% DMEM 高糖 + 10% 优质胎牛血清 + 1% 青霉素-链霉素双抗

3. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃

4. 推荐传代比例：1:2–1:4

5. 推荐换液频率：2–3 次/周

6. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-EDTA（BV2 贴壁不牢，消化时间宜短；悬浮部分离心收集合并）

7. 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

8. 倍增时间：约24–48小时

四、产品应用

1. 神经炎症基因功能筛选：LPS/炎症小体/极化相关基因的 CRISPR 功能缺失筛选

2. 神经退行性疾病机制：AD/PD 中小胶质激活与神经炎症的因果基因验证

3. 抗炎药物筛选：基于基因敲除株的抗炎靶点验证与药物评价

4. 共培养研究：Cas9 编辑后与神经元/星形胶质细胞共培养的功能研究

5. 信号通路研究：NF-κB、MAPK、JAK-STAT 等炎症通路的基因水平验证

五、产品优势

1. 宿主经典：BV2 神经炎症研究金标准模型，实验体系成熟、文献丰富

2. 即用高效：Cas9 已稳定表达——导入 sgRNA 即敲除，省去共转与筛选步骤

3. 工具平台：与 sgRNA 文库（全基因组/亚库）兼容，适合高通量筛选

4. 质量可靠：STR 鼠源鉴定正确，支原体检测阴性

六、培养方法

1. 细胞复苏：将完全培养液置 37℃ 水浴预热 30 分钟；从液氮取出冻存管暂放 -80℃ 让残余液氮挥发；复苏时稍稍甩动去除残留干冰和液氮，迅速用镊子夹住盖子放入 37℃ 水浴快速晃动（水不能没过盖子），约 1 分钟完全融化；超净台内酒精棉球擦拭消毒，将细胞悬液转入含 6–7 mL 预温完全培养基的 15 mL 离心管，1100 rpm室温离心 4 分钟；弃上清，1 mL 新鲜完全培养基重悬至单细胞悬液，转入装有 4 mL 完全培养基的 T25 培养瓶（或 6 cm 皿），37℃、5% CO₂ 饱和湿度培养。注意：请勿直接复苏到 T75 培养瓶或 10 cm 培养皿。

2. 细胞传代：细胞汇合度达80%–90%时，尽量吸净原培养基，加 2 mL 左右 PBS 轻轻晃动润洗后吸弃；加入 1 mL 左右 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 轻轻晃动浸润，37℃ 消化——镜下见细胞变圆脱落即终止（BV2 贴壁不牢，消化时间宜短）；加入 3 mL 含血清培养基终止，收集悬浮部分与消化下来的贴壁细胞合并，1000–1200 rpm离心3分钟，重悬后按比例接种新瓶。

3. 细胞冻存：无血清冻存液重悬细胞，程序降温后液氮长期保存；建议在较低代次冻存备份。

注意事项：BV2 贴壁不牢且部分悬浮，传代时务必同时收集悬浮细胞；本产品仅供科学研究使用，不得用于诊断、治疗、临床及其他非科研用途。

相关产品：BV2（小鼠小胶质细胞，野生型对照）、HT-22（小鼠海马神经元细胞，HY-C140）、CTX-TNA2（大鼠脑星形胶质细胞，HY-R503）