一、基本信息

1. 产品编号：HY-C136

2. 产品名称：B16-F10-Luc-tdTomato（小鼠黑色素瘤双标记细胞）

3. 英文名称：B16-F10-Luc-tdTomato Mouse Melanoma Luciferase and tdTomato Dual-Labeled Cell Line

4. 细胞别称：B16-F10-Luc-tdT、B16-F10-LUC-TOMATO、小鼠黑色素瘤双标记细胞

5. 种属来源：小鼠（C57BL/6 背景）

6. 组织来源：皮肤

7. 疾病背景：黑色素瘤（高转移亚系）

8. 细胞类型：荧光素酶/tdTomato 双报告基因稳定细胞系

9. 宿主细胞：B16-F10（Fidler 建立的经典高转移黑色素瘤模型）

10. 构建方式：慢病毒法稳定转导（Pool cells）

11. 报告基因：萤火虫荧光素酶（Luc）＋tdTomato 红色荧光蛋白

12. 抗性标记：嘌呤霉素（Puromycin）抗性，维持浓度 1.0 µg/mL

13. 细胞形态：上皮细胞样混有梭形细胞

14. 生长特性：贴壁生长

15. 细胞规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管

16. 传代代数：10代以内

17. RRID：CVCL_0159（宿主细胞 B16-F10，建议核对）

18. 保藏机构：ATCC; CRL-6475（宿主细胞 B16-F10）

19. 生物安全等级：BSL-1

20. 质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

二、细胞特征

1. 背景介绍：B16-F10-Luc-tdTomato 由经典小鼠黑色素瘤高转移细胞系 B16-F10 经慢病毒稳定转导构建，共表达萤火虫荧光素酶（Luc）与 tdTomato 红色荧光蛋白，带嘌呤霉素抗性。宿主 B16-F10 由 Fidler 等经连续体内筛选建立（B16-F0 第 10 代高转移亚系，源自 C57BL/6 小鼠皮肤黑色素瘤，ATCC CRL-6475）——与 C57BL/6 同源，可在免疫完整的小鼠中成瘤并形成肺/多器官转移，是黑色素瘤免疫治疗、肿瘤疫苗、纳米药物及转移研究引用最多的鼠源模型之一（Fidler IJ 等 1973–1977 年系列奠基文献）。

2. 双标记特性："Luc 活体成像＋tdTomato 红色荧光示踪"双模式——Luc 用于整体动物生物发光成像定量监测肿瘤负荷；tdTomato 是亮度高、光稳定性强的红色荧光蛋白（激发/发射 554/581 nm），波长远离培养基自发荧光与黑色素背景，特别适合黑色素瘤模型的深层组织荧光成像与共培养示踪，两种信号互补。

3. 生长特性：上皮细胞样混有梭形细胞，贴壁生长，倍增时间仅 18–24 小时，传代 1:3–1:6，培养周期紧凑。

三、培养条件

1. 基础培养基：DMEM 高糖

2. 培养基配方：88% DMEM 高糖 + 10% 优质胎牛血清 + 1% 青霉素-链霉素双抗 + 1.0 µg/mL 嘌呤霉素（维持双标记稳定）

3. 筛选维持：1.0 µg/mL 嘌呤霉素持续维持（如需降低筛选压力，常规培养亦可不加，建议定期复筛）

4. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃

5. 推荐传代比例：1:3–1:6

6. 推荐换液频率：每 2–3 天一次

7. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-EDTA

8. 冻存条件：60% 基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO 或无血清冻存液，液氮储存

9. 倍增时间：约18–24小时

四、产品应用

1. 黑色素瘤免疫治疗研究：免疫检查点抑制剂、肿瘤疫苗、CAR-T 体内外疗效评价

2. 活体生物发光成像：肿瘤生长、肺转移的定量动态监测

3. 红色荧光示踪：tdTomato 深组织成像、共培养示踪、流式分选

4. 转移研究：高转移表型、抗转移药物筛选

5. 纳米药物与递药系统：纳米平台肿瘤靶向与免疫激活评价

五、产品优势

1. 宿主权威：Fidler 经典高转移模型，ATCC CRL-6475 同源，文献引用极广

2. tdTomato 优势：高亮度红色荧光、抗光漂白、避开黑色素自发荧光背景——比 GFP 更适配黑色素瘤成像

3. 双标记灵活：Luc 定量成像＋tdTomato 荧光示踪，一细胞两用

4. 质量可靠：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

六、培养方法

1. 细胞复苏：37℃水浴快速融化冻存管，将细胞悬液转入含完全培养基（含 1.0 µg/mL 嘌呤霉素）的离心管，200–300×g 离心5分钟去除冻存液，新鲜完全培养基重悬后接种至培养瓶，37℃、5% CO₂ 培养，24小时后换液。注意：运输过程中脱落的漂浮细胞仍为活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2. 细胞传代：细胞汇合度达80%–90%时，弃培养上清，PBS润洗1–2次，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA于37℃消化1–2分钟，细胞变圆脱落即加入含血清培养基终止，按1:3–1:6比例接种新瓶；每 2–3 天换液。

3. 细胞冻存：采用 60% 基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO 冻存液或无血清冻存液重悬细胞，程序降温后液氮长期保存；建议在较低代次冻存备份。

注意事项：本产品仅供科学研究使用；体内成像实验需配套荧光素酶底物（D-荧光素）。

相关产品：B16-F10-OVA-Luc（小鼠黑色素瘤双标记细胞，HY-C135）、B16-F10-Luc（小鼠黑色素瘤荧光素酶细胞）、B16-F10-EGFP（小鼠黑色素瘤EGFP标记细胞）