一、基本信息

1. 产品编号：HY-C135

2. 产品名称：B16-F10-OVA-Luc（小鼠黑色素瘤双标记细胞）

3. 英文名称：B16-F10-OVA-Luc Mouse Melanoma OVA and Luciferase Dual-Labeled Cell Line

4. 细胞别称：B16-F10-OVA-LUC、B16F10-OVA-Luc

5. 种属来源：小鼠（C57BL/6 背景）

6. 组织来源：皮肤

7. 疾病背景：黑色素瘤（高转移亚系）

8. 细胞类型：OVA 过表达＋荧光素酶双标记稳定细胞系

9. 宿主细胞：B16-F10（B16-F0 第十代筛选的高转移亚系）

10. 构建方式：慢病毒感染 B16-F10 细胞，过表达 OVA 基因和 LUC

11. 细胞形态：同时存在梭形细胞和上皮样细胞

12. 生长特性：贴壁生长

13. 细胞规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管

14. 传代代数：10代以内

15. RRID：CVCL_0159（宿主细胞 B16-F10，建议核对）

16. 保藏机构：ATCC; CRL-6475（宿主细胞 B16-F10）

17. 生物安全等级：BSL-2（源站标注）

18. 质量检测：通过 STR 鉴定，支原体检测阴性

二、细胞特征

1. 背景介绍：B16-F10-OVA-Luc 由经典小鼠黑色素瘤高转移细胞系 B16-F10 经慢病毒感染构建——同时过表达鸡卵清蛋白（OVA）抗原与萤火虫荧光素酶（Luc）。宿主 B16-F10 是 B16-F0 黑色素瘤自第 10 次传代筛选出的高转移亚系，源自 C57BL/6 小鼠皮肤黑色素瘤（ATCC CRL-6475）——与 C57BL/6 同源，可在免疫系统完整的小鼠中成瘤并形成肺/多器官转移，是黑色素瘤免疫治疗、肿瘤疫苗、纳米药物及 BNCT 研究引用最多的鼠源模型之一。

2. 双功能标记："OVA 抗原＋Luc 发光"双功能——OVA 抗原用于 OT-I/OT-II OVA 特异性 T 细胞应答研究（肿瘤疫苗、CAR-T、TCR-T 疗效评价）；Luc 用于活体生物发光成像实时追踪肿瘤生长与转移，是黑色素瘤免疫治疗活体成像研究的特色模型。

3. 形态与生长：梭形与上皮样细胞混合存在，贴壁生长；细胞形态均一性差（梭形/上皮样并存）属该细胞正常特征；增殖稳定，传代性能好。

三、培养条件

1. 基础培养基：DMEM 高糖（含丙酮酸钠）

2. 培养基配方：89% DMEM 高糖（含丙酮酸钠）+ 10% 优质胎牛血清 + 1% 青霉素-链霉素双抗

3. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃

4. 推荐传代比例：1:3–1:6

5. 推荐传代周期：3–5 天

6. 推荐换液频率：每 2–3 天一次

7. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-EDTA

8. 冻存条件：90% FBS + 10% DMSO 或无血清冻存液，液氮储存

9. 倍增时间：约24–48小时

四、产品应用

1. 肿瘤免疫治疗研究：OVA 特异性 T 细胞（OT-I/OT-II）应答、肿瘤疫苗、CAR-T/TCR-T 疗法疗效评价

2. 活体生物发光成像：黑色素瘤原位/皮下/转移模型的实时无创监测

3. 黑色素瘤免疫治疗：免疫检查点抑制剂、纳米疫苗（Nature Nanotech 2026 同类模型）、BNCT 硼中子俘获治疗临床前研究

4. 转移研究：高转移表型、肺转移模型与抗转移药物筛选

5. 药物筛选：抗黑色素瘤候选药物的体内外活性评价

五、产品优势

1. 宿主权威：B16-F0 高转移亚系，ATCC CRL-6475 同源，文献引用极广

2. 双功能标记：OVA 抗原＋Luc 发光一细胞双用，"免疫监测＋活体成像"无缝衔接

3. 免疫完整模型兼容：C57BL/6 同源背景，适合免疫治疗研究

4. 质量可靠：通过 STR 鉴定，支原体检测阴性

六、培养方法

1. 细胞复苏：37℃水浴快速融化冻存管，1000 rpm离心5分钟去除冻存液，完全培养基重悬后接种至培养瓶，37℃、5% CO₂ 培养，24小时后换液。注意：运输过程中脱落的漂浮细胞仍为活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2. 细胞传代：细胞汇合度达80%–90%时，弃培养上清，PBS润洗1–2次，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA于37℃消化1–2分钟，细胞变圆脱落即加入含血清培养基终止，按1:3–1:6比例接种新瓶；每 2–3 天换液，传代周期约 3–5 天。

3. 细胞冻存：采用 90% FBS + 10% DMSO 冻存液或无血清冻存液重悬细胞，程序降温后液氮长期保存；建议在较低代次冻存备份。

注意事项：本细胞生物安全等级为 BSL-2（源站标注），请在二级生物安全柜内操作并做好个人防护；细胞形态同时存在梭形与上皮样细胞属正常特征；本产品仅供研究之用。

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