一、基本信息

1. 产品编号：HY-A559

2. 产品名称：NCI-H446-Luc（人小细胞肺癌荧光素酶标记细胞）

3. 英文名称：NCI-H446-Luc Human Small Cell Lung Cancer Luciferase Reporter Cell Line

4. 细胞别称：H446-Luc、NCI-H446-LUC、NCI-H446荧光素酶标记细胞

5. 种属来源：人

6. 年龄性别：61岁；男性

7. 组织来源：肺（胸膜转移灶/胸膜渗出癌）

8. 疾病背景：小细胞肺癌（SCLC）

9. 细胞类型：荧光素酶报告基因稳定细胞系

10. 宿主细胞：NCI-H446

11. 细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长（伴少量悬浮）

12. 生长特性：贴壁生长＋少量悬浮（半贴壁）

13. 细胞规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含量 >1×10⁶cells）

14. 传代代数：10代以内

15. RRID：CVCL_1565（宿主细胞 NCI-H446，建议按引种证书核对）

16. 保藏机构：ATCC; HTB-171（宿主细胞 NCI-H446）

17. 抗性标记：嘌呤霉素（Puromycin）抗性，建议筛选梯度 1→5 µg/mL

18. 生物安全等级：BSL-1

19. 质量检测：STR 鉴定正确，支原体检测阴性

二、细胞特征

1. 背景介绍：NCI-H446-Luc 由经典人小细胞肺癌细胞系 NCI-H446 经慢病毒稳定转染 Luc 基因构建。宿主 NCI-H446 于 1982 年从一位 61 岁白人男性肺小细胞癌患者的胸膜液中分离——原发肿瘤形态不典型，该细胞系是 SCLC 的生化与形态学变体：表达神经元特异性烯醇化酶（NSE）与肌酸激酶脑同工酶（BB-CK），无可检测水平的左旋多巴脱羧酶、铃蟾肽、加压素、催产素或胃泌素释放肽；C-myc DNA 扩增约 20 倍、c-myc mRNA 升高 15 倍；裸鼠体内可形成具有非典型小细胞肺癌组织学的可移植肿瘤。

2. MYC 扩增背景：c-myc 扩增约 20 倍——是 MYC 靶向治疗与 SCLC 分子机制研究的特色模型。

3. 生长特性：上皮样贴壁生长伴少量悬浮；贴壁不牢，传代时需同时收集悬浮细胞与贴壁细胞（PBS 润洗液也需回收）。

三、培养条件

1. 基础培养基：IMDM

2. 培养基配方：89% IMDM + 10% 优质胎牛血清 + 1% 青霉素-链霉素双抗

3. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃；湿度 70%–80%

4. 筛选维持：可加入嘌呤霉素梯度筛选维持荧光强度（1 µg/mL 起步，逐步增至 5 µg/mL；筛选流程详见培养方法）

5. 推荐传代比例：首次 1:2，后续 1:2–1:5

6. 推荐换液频率：2–3 次/周

7. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-0.53 mM EDTA（消化 1–2 分钟）

8. 冻存条件：90% FBS + 10% DMSO（现用现配）或无血清冻存液，液氮储存

9. 倍增时间：约24–48小时

四、产品应用

1. SCLC 活体成像：小细胞肺癌原位/皮下/转移模型的实时无创监测

2. MYC 靶向研究：c-myc 扩增背景下的靶向药物评价

3. 免疫治疗研究：SCLC 肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂体内疗效评价

4. 药物筛选：化疗（依托泊苷/顺铂）及新型化合物的体内外活性评价

5. 神经内分泌肿瘤研究：NSE、脑型肌酸激酶等标志物研究

五、产品优势

1. 宿主经典：1982 年建系，ATCC HTB-171 保藏，SCLC 研究引用广泛

2. 分子明确：c-myc 扩增 20 倍＋SCLC 神经内分泌标志物齐全

3. 筛选方案成熟：嘌呤霉素 1→5 µg/mL 梯度筛选流程标准化，可长期维持荧光强度

4. 质量可靠：STR 鉴定正确，支原体检测阴性

六、培养方法

1. 细胞复苏：37℃水浴快速摇晃融化冻存管（管口置于水面之上防污染），加入含 4–6 mL 完全培养基的离心管混匀，1000 rpm离心3–5分钟，弃上清，完全培养基重悬后转入含 6–8 mL 完全培养基的培养瓶，37℃ 培养过夜，第二天镜检观察。注意：运输用灌液培养基不能再用于培养细胞，请换用新配制的完全培养基；收到后第一次传代建议 T25 瓶 1:2 传代。

2. 细胞传代：细胞密度达 70–90% 时传代——先收集培养瓶中的悬浮细胞至离心管；用无钙镁 PBS 润洗细胞 1–2 次（细胞贴壁不牢，PBS 润洗后会脱落，PBS 也需回收到离心管）；加入 0.25% 胰蛋白酶-0.53 mM EDTA（T25 瓶 1–2 mL）37℃ 消化 1–2 分钟，镜下见大部分细胞变圆脱落即加含血清培养基终止；将悬浮细胞、PBS 清洗液中的细胞与消化下来的贴壁细胞合并，1000 rpm离心5分钟，重悬后按 1:2（首次）或 1:2–1:5（后续）接种新瓶，补足完全培养基。

3. 荧光维持筛选：细胞传代后 Luc 荧光会逐渐减弱，如需维持可用嘌呤霉素再次筛选——建议收到细胞后至少传 3 代、冻存留种后再筛选；初次用 1 µg/mL 嘌呤霉素完全培养基维持，无细胞漂浮或漂浮较少时换 2 µg/mL，以此类推至最高 5 µg/mL；筛选中漂浮细胞大于 60% 时停止筛选，换正常培养基培养至细胞密度约 80% 后再以同浓度继续；5 µg/mL 下细胞正常增殖即可停止筛选，换无药完全培养基正常培养。

4. 细胞冻存：建议培养前 3 代冻存种子批；按传代方法收集细胞，90% 血清 + 10% DMSO（现用现配）或无血清冻存液重悬至 1×10⁶–1×10⁷cells/mL，每管 1 mL，程序降温盒 -80℃ 过夜后转液氮长期保存。

注意事项：本细胞贴壁不牢、伴少量悬浮，传代时务必同时收集悬浮细胞与 PBS 润洗液中的细胞，避免细胞丢失；运输用灌液培养基不能再用于培养，请更换新配完全培养基；收到细胞后请拍照留存（4×/5× 确认状态，10×/20× 各 2–3 张＋培养瓶外观照），作为售后依据；本产品仅供科研使用。

相关产品：NCI-H82-Luc（人小细胞肺癌荧光素酶细胞）、NCI-H446（人小细胞肺癌细胞）、NCI-H69（人小细胞肺癌细胞）