一、基本信息

1. 产品编号：HY-C126

2. 产品名称：B16-OVA-Luc（小鼠黑色素瘤荧光素酶报告细胞）

3. 英文名称：B16-OVA Luciferase Reporter Cell Line

4. 细胞别称：B16-OVA-Luc、B16-OVA-Luciferase、B16-OVA荧光素酶细胞

5. 种属来源：小鼠

6. 组织来源：皮肤（黑色素瘤）

7. 疾病背景：黑色素瘤

8. 细胞类型：荧光素酶报告基因稳定细胞系

9. 宿主细胞：B16-OVA

10. 细胞形态：上皮样，贴壁生长

11. 生长特性：贴壁生长

12. 细胞规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管

13. 传代代数：10代以内

14. 抗性标记：嘌呤霉素（Puromycin）抗性，可添加 1 µg/mL 嘌呤霉素维持筛选

15. 生物安全等级：BSL-1

16. 质量检测：支原体、细菌、酵母、真菌检测均为阴性

二、细胞特征

1. 背景介绍：B16-OVA-Luc 细胞系由 B16-OVA 细胞系构建而成，B16-OVA 是经典小鼠 B16 黑色素瘤细胞系经基因工程改造表达鸡卵清蛋白（OVA）抗原的衍生细胞系，广泛用于肿瘤免疫学研究。本细胞系在 B16-OVA 基础上进一步稳定转染荧光素酶（Luciferase）报告基因，实现"发光成像＋OVA 抗原"双功能标记。

2. 功能特性：细胞组成型表达荧光素酶，在 D-荧光素底物存在下发出生物发光信号，信号强度与活细胞数量呈正相关，可通过活体生物发光成像实时、无创地追踪体内肿瘤生长、转移及消退过程。

3. 配套模型：与 C57BL/6 背景小鼠及 OT-I/OT-II OVA 特异性 T 细胞受体转基因小鼠配套使用，可系统评价抗原特异性抗肿瘤免疫反应。

三、培养条件

1. 基础培养基：DMEM 高糖

2. 培养基配方：89% DMEM 高糖 + 10% 优质胎牛血清 + 1% 青霉素-链霉素双抗

3. 筛选维持：可添加 1 µg/mL 嘌呤霉素维持抗性标记筛选（常规培养亦可不加）

4. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃

5. 推荐传代比例：1:2–1:4

6. 推荐换液频率：2–3 次/周

7. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-EDTA

8. 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

9. 倍增时间：约24–36小时

四、产品应用

1. 肿瘤免疫治疗研究：免疫检查点抑制剂、肿瘤疫苗、CAR-T/TCR-T 细胞疗法的体内疗效评价

2. 活体生物发光成像：小动物模型中肿瘤生长、转移及治疗反应的实时无创监测

3. 抗原特异性免疫研究：OVA 抗原特异性 T 细胞（OT-I/OT-II）应答、抗原呈递与免疫监视研究

4. 抗肿瘤药物筛选：候选药物体内外活性评价、联合用药方案研究

五、产品优势

1. 双重标记：稳定表达荧光素酶与 OVA 抗原，"活体成像＋免疫监测"一细胞双用

2. 成像灵敏：发光信号与细胞数量线性相关，适合长时程活体追踪

3. 背景经典：源于 C57BL/6 背景 B16 黑色素瘤模型，与 OT-I/OT-II 转基因小鼠配套成熟

4. 质量可靠：支原体、细菌、酵母、真菌检测均为阴性，带抗性标记便于筛选维持，复苏活率高

六、培养方法

1. 细胞复苏：37℃水浴快速融化冻存管（管帽勿浸入水面以防污染），将细胞悬液转入含完全培养基的离心管，1000 rpm离心5分钟去除冻存液，新鲜完全培养基重悬后接种至培养瓶，24小时后观察换液。

2. 细胞传代：细胞汇合度达80%–90%时，弃培养上清，PBS润洗1–2次，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA于37℃消化1–2分钟，细胞变圆脱落即加入含血清培养基终止，按1:2–1:4比例接种新瓶。

3. 细胞冻存：无血清冻存液重悬细胞，程序降温后液氮长期保存；建议在较低代次冻存备份。

注意事项：本产品仅供科学研究使用，不得用于诊断、治疗、临床及其他非科研用途。

七、相关产品

1. 相关产品：B16F10（小鼠黑色素瘤细胞）、B16-OVA（小鼠黑色素瘤OVA抗原细胞）、LL/2-Luc（小鼠Lewis肺癌荧光素酶细胞）