一、基本信息

1. 产品编号：HY-A593

2. 产品名称：293T-FKBP1A-KO（人胚肾细胞 FKBP1A 基因敲除株）

3. 英文名称：293T-FKBP1A-KO FKBP1A Knockout Stable Cell Line

4. 细胞别称：293T KO-hFKBP1A、FKBP1A-KO 293T、FKBP12-KO 细胞

5. 种属来源：人

6. 组织来源：肾（胚胎）

7. 疾病背景：正常细胞（FKBP12/mTOR 通路研究模型）

8. 细胞类型：基因敲除稳定细胞系（纯合子克隆）

9. 宿主细胞：293T [HEK-293T]（SV40 大 T 抗原转化，ATCC CRL-3216，站内 HY-A589）

10. 敲除基因：FKBP1A（FK506 结合蛋白 1A，FKBP12 蛋白，基因 ID 2280）

11. 构建技术：CRISPR-Cas9（蛋白法 RNP 转导，编辑后无载体残留）

12. 敲除验证：PCR＋测序（基因组水平确认，提供测序鉴定报告）

13. 抗性标记：无（蛋白法 RNP 构建，无抗性基因整合）

14. 细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长

15. 生长特性：贴壁生长（贴壁松散，操作轻柔）

16. 细胞规格：1×10⁶cells/冻存管

17. 传代代数：10代以内

18. RRID：CVCL_0063（宿主细胞 293T，建议核对）

19. 保藏机构：ATCC; CRL-3216（宿主细胞 293T）

20. 生物安全等级：BSL-1

21. 质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性；PCR＋测序鉴定

二、细胞特征

1. 背景介绍：FKBP1A（FK506 Binding Protein 1A，又称 FKBP12）编码 12 kDa 的肽脯氨酰顺反异构酶（PPIase）——既是蛋白折叠酶，更是免疫抑制剂与细胞信号的核心节点：FKBP12-雷帕霉素（rapamycin）复合物抑制 mTORC1（雷帕霉素类药物作用机制的分子基础）；同时 FKBP1A 被鉴定为多种病毒入侵的宿主因子（Nat Microbiol 2020 等文献）。

2. 产品特性：利用 CRISPR-Cas9 技术（蛋白法 RNP 转导）对 293T 细胞的 FKBP1A 基因进行敲除，获得纯合子克隆，PCR＋测序验证——是 FKBP12 功能缺失（loss-of-function）研究、mTOR 通路与病毒入侵宿主因子筛选的标准工具细胞。

3. 构建优势：蛋白法 RNP 转导——编辑后无病毒载体/抗性基因残留，基因组背景更干净，适合后续回补与精准功能实验。

三、培养条件

1. 基础培养基：DMEM 高糖

2. 培养基配方：89% DMEM 高糖 + 10% 优质胎牛血清 + 1% 青霉素-链霉素双抗

3. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃

4. 推荐传代比例：1:4–1:8

5. 推荐换液频率：每 2–3 天一次（传代周期 24–48h）

6. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-EDTA（293T 贴壁松散，消化时间宜短）

7. 冻存条件：60% 基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO 或无血清冻存液，液氮储存

8. 倍增时间：约24–48小时

四、产品应用

1. mTOR/雷帕霉素通路研究：FKBP12 缺失对 mTORC1 信号、自噬与细胞生长的影响

2. 免疫抑制剂机制：他克莫司（FK506）/雷帕霉素的作用靶点验证与脱靶研究

3. 病毒入侵宿主因子筛选：冠状病毒等病毒入侵的宿主依赖基因功能验证（Letko 2020 文献体系）

4. 蛋白折叠与 PPIase 功能：FKBP12 的酶活性与底物研究

5. 基因功能研究：FKBP1A 回补救援实验（以 293T 野生型 HY-A589 为对照）

五、产品优势

1. 通路对口：mTOR/雷帕霉素通路核心节点——免疫抑制剂与信号研究高度对口

2. 构建干净：蛋白法 RNP 转导、无抗性标记——基因组背景干净，实验干扰小

3. 纯合验证：纯合子克隆，PCR＋测序鉴定——基因型明确

4. 宿主可靠：293T 转染金标准宿主，与野生型对照（HY-A589）配套使用

六、培养方法

1. 细胞复苏：37℃水浴快速融化冻存管，将细胞悬液转入含完全培养基的离心管，200–300×g 离心5分钟去除冻存液，新鲜完全培养基重悬后接种至培养瓶，37℃、5% CO₂ 培养，24小时后换液。注意：293T 贴壁松散，操作请轻柔；收到细胞请按产品资料了解贴壁特性、形态、培养体系、传代比例与换液频率后再处理。

2. 细胞传代：细胞汇合度达80%–90% 时，弃培养上清，预温 PBS 润洗1–2次，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA于37℃消化1–2分钟（时间宜短），细胞变圆脱落即加入含血清培养基终止，按1:4–1:8比例接种新瓶；每 2–3 天换液。

3. 细胞冻存：采用 60% 基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO 冻存液或无血清冻存液重悬细胞，程序降温后液氮长期保存；建议在较低代次冻存备份。

注意事项：293T 贴壁松散，所有操作请尽量轻柔，避免剧烈吹打与晃动；本产品仅供科学研究使用，不得用于诊断、治疗、临床及其他非科研用途。

相关产品：293T（人胚肾细胞，野生型对照，HY-A589）、293T-LDLR-KO（人胚肾细胞 LDLR 敲除株，HY-A591）、HEK293-PCCA-KO（人胚肾细胞 PCCA 敲除株，HY-A583）