一、基本信息

1. 产品编号：HY-A591

2. 产品名称：293T-LDLR-KO（人胚肾细胞 LDLR 基因敲除株）

3. 英文名称：293T-LDLR-KO LDLR Knockout Stable Cell Line

4. 细胞别称：LDLR-KO 293T、LDLR-KO HEK293、FH 细胞模型

5. 种属来源：人

6. 组织来源：肾（胚胎）

7. 疾病背景：正常细胞（家族性高胆固醇血症致病基因研究模型）

8. 细胞类型：基因敲除稳定细胞系（纯合单克隆）

9. 宿主细胞：293T [HEK-293T]（SV40 大 T 抗原转化，ATCC CRL-3216，站内 HY-A589）

10. 敲除基因：LDLR（低密度脂蛋白受体，基因 ID 3949），E2 外显子区域双 gRNA 敲除（参考转录本 NM_000282，gRNA1: GCAAAGCCTCCAGAATGCAC；gRNA2: GATTCCTGTCTACTTCCTAG）

11. 构建技术：CRISPR-Cas9（EZ-editor™ 技术平台，编辑效率提升 10–20 倍）

12. 敲除验证：PCR＋Sanger 测序（基因组水平确认，提供测序鉴定报告）

13. 细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长

14. 生长特性：贴壁生长

15. 细胞规格：1×10⁶cells/冻存管 或 1×T25 培养瓶（活细胞）

16. 传代代数：10代以内

17. RRID：CVCL_0063（宿主细胞 293T，建议核对）

18. 保藏机构：ATCC; CRL-3216（宿主细胞 293T）

19. 生物安全等级：BSL-1

20. 质量检测：STR 鉴定正确（20 位点，与 ATCC/DSMZ/JCRB/RIKEN 数据库收录的 HEK293 数据匹配）；75 种常见及罕见支原体 PCR 检测全阴；细菌、真菌、病毒及其他毒素检测阴性

二、细胞特征

1. 背景介绍：LDLR（Low-Density Lipoprotein Receptor，低密度脂蛋白受体）编码血浆 LDL 颗粒的内吞受体——通过与 LDL 颗粒中的 ApoB/ApoE 结合介导胆固醇摄取，是维持血浆胆固醇稳态的核心分子；其胞外域结合 LDL、胞内 NPXY 基序介导网格蛋白内吞、回收到细胞膜，循环过程受 PCSK9 调控。LDLR 双等位基因功能缺失突变导致家族性高胆固醇血症（Familial Hypercholesterolemia, FH）——最常见的单基因脂质代谢病，患者血浆 LDL-C 显著升高、早发动脉粥样硬化与冠心病；LDLR 也是 PCSK9 抑制剂（依洛尤单抗等）与他汀类药物作用通路的靶点核心。

2. 产品特性：利用 CRISPR-Cas9 技术对 293T 细胞的 LDLR 基因 E2 外显子区域（双 gRNA 方案）进行精准敲除，经极限稀释法获得纯合单克隆，PCR＋Sanger 测序验证基因型——是 LDLR 功能缺失（loss-of-function）研究、LDL 摄取功能实验与降脂药物体外评价的标准工具细胞。

3. 宿主优势：293T 为转染/病毒包装领域金标准宿主——转染效率极高、携带 Neo/G418 抗性（站内 HY-A589 已交付），适合后续回补实验（LDLR 野生型回补构建）与高通量筛选。

三、培养条件

1. 基础培养基：DMEM 高糖

2. 培养基配方：90% DMEM 高糖 + 10% 优质胎牛血清（含 1% 双抗）

3. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃

4. 推荐传代比例：1:3–1:6

5. 推荐换液频率：2–3 次/周（培养基预热，动作轻柔——293T 贴壁松散）

6. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-EDTA（消化时间宜短）

7. 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存管干冰运输／活细胞常温运输）

8. 倍增时间：约24–36小时

四、产品应用

1. 家族性高胆固醇血症研究：LDLR 缺失导致的 LDL 清除障碍、胆固醇蓄积与细胞毒性机制

2. LDL 摄取功能实验：DiI-LDL/Dil-LDL 摄取缺失对照（野生型 293T 的平行对照）、LDLR 回补救援实验

3. 降脂药物评价：PCSK9 抑制剂、他汀类药物、新型降脂候选化合物的体外活性与机制研究

4. 动脉粥样硬化机制：泡沫细胞形成、脂质沉积与血管炎症的分子机制

5. 基因功能研究：LDLR 突变体功能分析（FH 患者突变的功能验证平台）

五、产品优势

1. 疾病对口：FH 致病基因敲除——遗传性高胆固醇血症研究高度对口，PCSK9 通路研究核心模型

2. 敲除彻底：纯合单克隆，E2 关键外显子双 gRNA 敲除——功能缺失明确

3. 验证齐全：PCR＋Sanger 测序鉴定＋20 位点 STR 国际数据库匹配＋75 种支原体全阴

4. 文献背书：Nature（IF 64.8）、Immunity（IF 32.4）、Cell Metabolism（IF 27.7）等高分期刊同款 KO 细胞工具

六、培养方法

1. 细胞复苏：37℃水浴快速融化冻存管，将细胞悬液转入含完全培养基的离心管，200–300×g 离心5分钟去除冻存液，新鲜完全培养基重悬后接种至培养瓶，37℃、5% CO₂ 培养，24小时后换液。注意：293T 贴壁松散，操作请轻柔；运输过程中脱落的漂浮细胞仍为活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2. 细胞传代：细胞汇合度达80%–90%时，弃培养上清，预温 PBS 润洗1–2次，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA于37℃消化1–2分钟（时间宜短），细胞变圆脱落即加入含血清培养基终止，按1:3–1:6比例接种新瓶；每 2–3 天换液。

3. 细胞冻存：无血清冻存液重悬细胞，程序降温后液氮长期保存；建议在较低代次冻存备份。

注意事项：293T 贴壁松散，所有操作请尽量轻柔，避免剧烈吹打与晃动；本产品仅供进一步科研使用，不得用于诊断治疗、临床及其他用途。

相关产品：293T（人胚肾细胞，野生型对照，HY-A589）、LDLR-KO AC16（如库存，YKO-HB36910）、LDLR-KO BEAS-2B（如库存，YKO-HB21428）、HeLa-CIP2A-KO（人宫颈癌细胞 CIP2A 敲除株，HY-A573）