一、基本信息

1. 产品编号：HY-A146

2. 产品名称：HBVP-SV40T-hTERT人脑血管周细胞永生化

3. 英文名称：Human Brain Vascular Pericytes Immortalized

4. 种属来源：人

5. 组织来源：脑

6. 生长特性：贴壁生长

7. 细胞形态：长梭形细胞、不规则细胞

8. 细胞代数：永生化细胞系

9. 产品规格：1×10⁶ cells/T25或1mL冻存管

二、细胞特征

1. 细胞类型：脑血管周细胞

2. 永生化方式：通过慢病毒转染携带SV40基因和hTERT基因实现永生化

3. 抗性标记：转染后细胞带有嘌呤霉素抗性

4. 分子特征：SV40大T抗原和端粒酶逆转录酶双重永生化，维持细胞长期增殖能力

5. 支原体检测：无支原体污染

6. 应用特性：适用于血脑屏障研究、脑血管疾病模型及药物筛选

7. 品质保证：严格的质量控制流程

8. 运输方式：复苏发货或冻存发货

三、培养条件

1. 专用培养基：HBVP-SV40T-hTERT人脑血管周细胞永生化专用培养基

2. 培养环境：气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃

3. 传代频率：每周2-3次

4. 传代密度：细胞密度达80%-90%时进行传代

5. 传代比例：1:2至1:3

6. 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

7. 首次传代：建议1:2传代

四、产品应用

1. 血脑屏障研究：脑血管周细胞是血脑屏障的重要组成部分，适用于BBB模型构建和功能研究

2. 脑血管疾病模型：脑卒中、阿尔茨海默病、脑微血管病变等疾病机制研究

3. 药物筛选：中枢神经系统药物透过血脑屏障能力的评价和筛选

4. 细胞间相互作用：与脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞共培养研究

5. 周细胞生物学：血管稳态维持、血管生成调控机制研究

6. 神经血管单元研究：神经-血管耦合机制及神经血管单元功能分析

7. 肿瘤研究：脑肿瘤血管微环境及周细胞在肿瘤进展中的作用研究

五、产品优势

1. 永生化稳定：SV40+hTERT双重永生化系统，细胞可长期稳定传代，避免原代细胞衰老限制

2. 功能保留：永生化后保留脑血管周细胞典型形态和关键功能特征

3. 来源可靠：严格的质量控制，确保细胞品质和批次稳定性

4. 应用专业：专门针对血脑屏障和脑血管研究领域优化

5. 操作便捷：标准化培养方案，易于实验室常规操作

6. 抗性筛选：嘌呤霉素抗性便于后续基因编辑和筛选实验

7. 专业支持：提供专业技术指导、培养方案优化和售后服务

六、培养方法

1. 收货处理：T25瓶：75%酒精消毒瓶壁，37℃培养箱静置2-4小时；冻存管：立即转入液氮冻存或直接复苏。

2. 复苏操作：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。

3. 传代操作：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加入0.25% Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4mL完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2比例分到新的含6-8mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

4. 冻存操作：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液。将冻存管放入-80℃冰箱，24h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

七、注意事项

1. 收货验收：收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发、细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和Cell Factory联系。

2. 信息核对：仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 复苏静置：用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 培养基更换：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

5. 传代比例：收到细胞后第一次传代建议1:2传代。注意：1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿，不是1个T25瓶传2个10cm皿。

6. 影像记录：建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和Cell Factory技术部沟通交流。

7. 异常反馈：由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和Cell Factory联系，告知细胞的具体情况，以便技术人员跟踪回访直至问题解决。

8. 用途限制：该细胞仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。

9. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行，确保无菌环境。

10. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长，避免过度消化损伤细胞。