一、基本信息

1. 产品编号：HY-C132

2. 产品名称：MB49-Luc-GFP（小鼠膀胱癌双标记细胞）

3. 英文名称：MB49-Luc-GFP Mouse Bladder Cancer Luciferase and GFP Dual-Labeled Cell Line

4. 细胞别称：MB49-Luc-GFP、MB-49-Luc-GFP、小鼠膀胱癌细胞双标记株

5. 种属来源：小鼠（C57BL/6 背景）

6. 组织来源：膀胱

7. 疾病背景：膀胱癌

8. 细胞类型：荧光素酶/GFP 双报告基因稳定细胞系

9. 宿主细胞：MB-49（小鼠膀胱癌细胞系）

10. 构建方式：慢病毒稳定转导（Pool cells）

11. 报告基因：萤火虫荧光素酶（Luc）＋绿色荧光蛋白（GFP）双标记

12. 抗性标记：嘌呤霉素（Puromycin）抗性

13. 验证方式：qPCR 验证

14. 细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长

15. 生长特性：贴壁生长

16. 细胞规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管

17. 传代代数：10代以内

18. RRID：—（以引种证书为准）

19. 保藏机构：—（见引种证书）

20. 生物安全等级：BSL-1

21. 质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

二、细胞特征

1. 背景介绍：MB49-Luc-GFP 由经典小鼠膀胱癌细胞系 MB-49 经慢病毒稳定转导构建，共表达萤火虫荧光素酶（Luc）与绿色荧光蛋白（GFP），带嘌呤霉素抗性，经 qPCR 验证。宿主 MB-49 源自 C57BL/6 小鼠，是国际公认的膀胱癌同源移植（syngeneic）研究经典模型——可在免疫完整的 C57BL/6 小鼠中建立原位膀胱癌模型，广泛用于膀胱癌免疫治疗、BCG 膀胱灌注疗法及肿瘤微环境研究。

2. 双标记特性："发光成像＋荧光示踪"双模式——Luc 用于活体生物发光成像，实时追踪肿瘤体内生长与转移；GFP 用于蓝光激发下的荧光示踪、共培养及流式分选，两种信号互补、实验设计灵活。

3. 生长特性：上皮细胞样，贴壁生长，倍增时间约 48–72 小时，增殖稳定，传代性能好。

三、培养条件

1. 基础培养基：DMEM 高糖

2. 培养基配方：88% DMEM 高糖 + 10% 优质胎牛血清 + 1% 青霉素-链霉素双抗 + 1.0 µg/mL 嘌呤霉素（维持双标记稳定）

3. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃

4. 推荐传代比例：1:3–1:6

5. 推荐换液频率：每 2–3 天一次

6. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-EDTA

7. 冻存条件：60% 基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO 或无血清冻存液，液氮储存

8. 倍增时间：约48–72小时

四、产品应用

1. 膀胱癌免疫治疗研究：免疫完整 C57BL/6 小鼠同源模型中的免疫检查点抑制剂、肿瘤疫苗、CAR-T 疗效评价

2. BCG 膀胱灌注疗法研究：卡介苗灌注治疗的体内模型与机制研究

3. 活体生物发光成像：原位/皮下膀胱癌模型的生长、转移实时无创监测

4. GFP 荧光示踪：细胞共培养、体内外示踪、流式细胞术分选与分析

5. 药物筛选：抗膀胱癌候选药物的体内外活性评价

五、产品优势

1. 宿主经典：C57BL/6 同源膀胱癌模型，免疫治疗与 BCG 研究引用广泛

2. 双标记灵活：Luc 活体成像＋GFP 荧光示踪双模式，一细胞两用

3. 构建规范：慢病毒稳定转导、qPCR 验证、Pool cells 稳定扩增

4. 质量可靠：细菌、真菌、支原体检测均为阴性，复苏活率高

六、培养方法

1. 细胞复苏：37℃水浴快速融化冻存管，将细胞悬液转入含完全培养基（含 1.0 µg/mL 嘌呤霉素）的离心管，200–300×g 离心5分钟去除冻存液，新鲜完全培养基重悬后接种至培养瓶，37℃、5% CO₂ 培养，24小时后换液。注意：运输过程中贴壁细胞可能有少量脱落漂浮，这些仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2. 细胞传代：细胞汇合度达80%–90%时，弃培养上清，PBS润洗1–2次，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA于37℃消化1–2分钟，细胞变圆脱落即加入含血清培养基终止，按1:3–1:6比例接种新瓶；每 2–3 天换液。

3. 细胞冻存：采用 60% 基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO 冻存液或无血清冻存液重悬细胞，程序降温后液氮长期保存；建议在较低代次冻存备份。

注意事项：体内成像实验需配套荧光素酶底物（D-荧光素）；本产品仅用于科研实验，不可用于临床治疗。

相关产品：MB49（小鼠膀胱癌细胞）、MB49-Luc（小鼠膀胱癌荧光素酶细胞）、T24-Luc-GFP（人膀胱癌双标记细胞）