一、基本信息

1. 产品编号：HY-A553

2. 产品名称：NCI-H520-Luc（人肺鳞癌荧光素酶标记细胞）

3. 英文名称：NCI-H520-Luc Human Lung Squamous Cell Carcinoma Luciferase Reporter Cell Line

4. 细胞别称：H520-Luc、NCI-H520-LUC、NCI-H520荧光素酶标记细胞

5. 种属来源：人

6. 年龄性别：—（男性，年龄不详）

7. 组织来源：肺

8. 疾病背景：肺鳞状细胞癌

9. 细胞类型：荧光素酶报告基因稳定细胞系

10. 宿主细胞：NCI-H520（ATCC HTB-182）

11. 细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长

12. 生长特性：贴壁生长

13. 细胞规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管

14. 传代代数：10代以内

15. RRID：CVCL_1566（宿主细胞 NCI-H520，建议按引种证书核对）

16. 保藏机构：ATCC; HTB-182（宿主细胞 NCI-H520）

17. 生物安全等级：BSL-1

18. 分子特征（宿主）：p53 mRNA 低表达（无大结构 DNA 异常）；角蛋白、波形蛋白阳性，神经丝三联蛋白阴性；软琼脂可成克隆；裸鼠 21 天 100% 成瘤

19. 质量检测：无菌检测合格，无支原体污染；STR 鉴定正确（Amelogenin: X；CSF1PO: 10；D13S317: 10,11；D16S539: 8,13；D5S818: 12,13；D7S820: 8,12；TH01: 10；TPOX: 8；vWA: 18,19）

二、细胞特征

1. 背景介绍：NCI-H520-Luc 由经典人肺鳞癌细胞系 NCI-H520 稳定转染萤火虫荧光素酶（Luciferase）构建。宿主 NCI-H520 由 A.F. Gazdar 等于 1982 年从男性肺鳞状细胞癌患者组织建立（ATCC HTB-182），是 NCI 肺癌细胞系 panel 的经典成员，在肺鳞癌病因学、分子机制与药物筛选研究中被广泛引用。

2. 宿主分子与成瘤特性：p53 mRNA 表达水平较正常肺组织低；角蛋白、波形蛋白阳性，神经丝三联蛋白阴性；软琼脂中可形成克隆；裸鼠皮下接种 1×10⁷ 细胞 21 天内 100% 成瘤——体内外模型兼备，成瘤数据明确。

3. 发光性能：组成型稳定表达萤火虫荧光素酶，发光信号与活细胞数量正相关，适合活体成像与细胞示踪；细胞可呈堆积生长，传代时建议离心处理后接种。

三、培养条件

1. 基础培养基：RPMI-1640

2. 培养基配方：89% RPMI-1640 + 10% 优质胎牛血清 + 1% 青霉素-链霉素双抗

3. 培养环境：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃

4. 推荐传代比例：1:3–1:4

5. 推荐换液频率：2–3 次/周

6. 消化液类型：0.25% 胰蛋白酶-EDTA（消化 2–3 分钟）

7. 冻存条件：55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO 或无血清冻存液，液氮储存

8. 倍增时间：约32–60小时

四、产品应用

1. 活体生物发光成像：肺鳞癌皮下/原位模型生长与转移的实时无创监测

2. 肺鳞癌机制研究：NSCLC 鳞癌亚型发生发展、p53 低表达背景下的分子机制研究

3. 免疫治疗研究：肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂的体内疗效评价

4. 药物筛选：化疗及靶向药物的体内外活性评价

5. 报告基因检测：荧光素酶活性检测阳性对照、启动子活性分析

五、产品优势

1. 宿主权威：1982 年建系，ATCC HTB-182 保藏，NCI 肺癌 panel 经典成员，文献引用广泛

2. 成瘤性强：裸鼠 21 天 100% 成瘤，成瘤数据明确

3. 发光稳定：萤火虫荧光素酶稳定表达，成像与示踪双重适用

4. 质量可靠：STR 鉴定正确，支原体检测阴性，来源可溯源

六、培养方法

1. 细胞复苏：将完全培养液置 37℃ 水浴预热 30 分钟；从液氮取出冻存管暂放 -80℃ 让残余液氮挥发；复苏时稍稍甩动去除残留干冰和液氮，迅速用镊子夹住盖子放入 37℃ 水浴快速晃动（水不能没过盖子），约 1 分钟完全融化；超净台内酒精棉球擦拭消毒，将细胞悬液转入含 6–7 mL 预温完全培养基的 15 mL 离心管，1100 rpm 室温离心 4 分钟；弃上清，1 mL 新鲜完全培养基重悬至单细胞悬液，转入装有 4 mL 完全培养基的 T25 培养瓶（或 6 cm 皿），37℃、5% CO₂ 饱和湿度培养。注意：请勿直接复苏到 T75 培养瓶或 10 cm 培养皿。

2. 细胞传代：细胞汇合度达80%–90%时，尽量吸净原培养基，加 2 mL 左右 PBS 轻轻晃动润洗细胞后吸弃；加入 1 mL 左右 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 轻轻晃动浸润所有细胞，放入培养箱消化——显微镜下看到细胞块中间的细胞明显变圆有间隙时即可终止（全程不要拍打培养瓶）；加入 3 mL 含血清培养基终止消化，吹打细胞使之脱壁并反复吹打成尽量单颗细胞悬液；收集细胞悬液 1200 rpm离心3分钟，弃上清，加新鲜培养基混匀，按比例接种新瓶，补足培养基，拧松瓶盖或用透气瓶盖培养。

3. 细胞冻存：采用 55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO 冻存液或无血清冻存液重悬细胞，程序降温后液氮长期保存；建议在较低代次冻存备份。

注意事项：细胞传代时建议离心处理，可避免细胞堆积生长；本产品仅供科学研究使用，不得用于诊断、治疗、临床及其他非科研用途。

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