一、基本信息

1. 产品编号：HY-I178

2. 产品名称：人原代肝癌亚力山大细胞

3. 英文名称：Human Hepatocellular Carcinoma Cells (Alexander)

4. 种属来源：人

5. 组织来源：肝癌

6. 细胞类型：原代细胞

7. 生长特性：贴壁生长

8. 细胞形态：上皮细胞样

9. 传代能力：可传代

10. 生物安全等级：1级

11. 产品规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1 mL冻存管

12. 质量检测：细胞纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

13. 专用培养基：人肝癌亚力山大细胞专用培养基

14. 培养条件：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

15. 换液频率：每2-3天换液一次

16. 消化液：0.25%胰蛋白酶

17. 运输方式：T25培养瓶/顺丰快递

18. 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的上皮细胞样形态，细胞贴壁生长，呈多角形或不规则铺路石状，细胞间连接较为紧密。

2. 来源与背景：直接分离自人肝癌组织，保留了原发肿瘤的许多生物学特性，相比永生化细胞系，能更真实地反映肝癌患者的肿瘤异质性和体内微环境特征。

3. 功能特性：

肿瘤特性保留：保留了肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移等恶性表型，是研究肝癌生物学行为的高相关性模型。

药物反应性：因其更接近临床肿瘤，常用于评估化疗药物（如索拉非尼、仑伐替尼）、靶向药物及新型抗癌疗法的体外敏感性，结果更具临床参考价值。

分子特征：可用于研究肝癌相关的驱动基因突变（如TP53, CTNNB1）、信号通路异常（如Wnt/β-catenin, PI3K/Akt/mTOR）及肿瘤标志物表达。

三、培养条件

1. 专用培养基：人原代肝癌亚力山大细胞专用培养基

2. 培养环境：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

3. 换液频率：每2-3天更换一次新鲜完全培养基。

四、产品应用

1. 肝癌发病机制研究：用于探究肝癌发生、发展、转移的细胞与分子机制，研究癌基因、抑癌基因、非编码RNA等在肝癌进程中的作用。

2. 抗肝癌药物筛选与药效评估：作为原发性肝癌细胞模型，用于高通量或小规模筛选靶向药物、化疗药物、中药单体及联合用药方案的体外抗肿瘤活性（抑制增殖、诱导凋亡、抑制迁移等）。

3. 肝癌耐药性研究：可用于建立获得性耐药模型，研究肝癌对索拉非尼等一线药物产生耐药的机制，并寻找逆转耐药的新策略。

4. 肿瘤免疫与微环境研究：可与免疫细胞（如T细胞、NK细胞）共培养，研究肝癌细胞的免疫逃逸机制及免疫治疗（如CAR-T, 免疫检查点抑制剂）的潜在效果。

5. 个体化医疗与生物标志物发现：作为来源于特定患者的原代细胞，可用于辅助临床前药敏测试，或用于发现新的诊断和治疗生物标志物。

五、产品优势

1. 高临床相关性：作为人原代肝癌细胞，最大程度保留了患者肿瘤的原始特性（包括遗传异质性、药物敏感性等），实验结果更具临床转化潜力。

2. 高纯度与安全性：细胞纯度高于90%，且经过严格检测，确保无HIV-1、HBV、HCV、支原体等常见污染物，使用安全。

3. 配套专用培养体系：提供经过优化的人肝癌亚力山大细胞专用培养基，为细胞提供最佳生长环境，维持其特异性功能，简化培养流程。

4. 研究价值高：是连接基础研究与临床应用的理想桥梁，特别适用于需要高仿真度肝癌模型的研究领域。

六、培养方法

1. 收货处理（T25瓶发货）：

收货检查：收到细胞后，观察细胞瓶是否完好，培养基有无漏液、浑浊。

稳定细胞：用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，将T25瓶放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。

首次观察：静置后，在显微镜下观察细胞形态、贴壁情况及密度，并拍照记录。

2. 传代操作：

时机判断：当细胞密度达到80%-90% 融合时进行传代。

洗涤：吸出旧培养基，用无菌PBS轻轻清洗细胞一次。

特殊消化步骤（覆盖后吸出法）：
a. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25瓶中，轻微转动使消化液覆盖整个瓶底。
b. 吸出多余胰蛋白酶消化液，仅留薄层覆盖细胞。
c. 将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟。

观察与终止：在倒置显微镜下观察，待细胞变圆、间隙增大时，立即加入5mL新鲜专用完全培养基终止消化。

吹打与收集：用吸管轻轻吹打瓶底，使细胞完全脱落，形成单细胞悬液。

分瓶接种：按1:2的传代比例，将细胞悬液分到新的T25培养瓶中（即1瓶传2瓶）。

补充培养基：向每个新瓶中加入新鲜的专用完全培养基，使总体积约为5mL。

培养：将培养瓶放回培养箱，待细胞完全贴壁后，定期观察。之后每2-3天换液一次。

3. 冻存操作（建议使用配套无血清冻存液）：

选择细胞：选择处于对数生长期、状态良好的细胞进行冻存。

消化收集：按上述传代方法消化并收集细胞，离心后弃上清。

配制冻存悬液：使用无血清细胞冻存液重悬细胞，调整细胞密度至1×10⁶ ~ 5×10⁶ cells/mL。

分装：将细胞悬液分装至冻存管，每管1.0-1.5 mL，做好标记。

程序冻存：采用程序降温（建议使用程序降温盒：4℃ 30min → -20℃ 2h → -80℃过夜），最后转移至液氮中长期保存。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。