一、基本信息

1. 产品编号：HY-K070

2. 细胞名称：小鼠原代胚胎干细胞

3. 英文名称：Mouse Primary Embryonic Stem Cells (mESCs)

4. 组织来源：小鼠囊胚期内细胞团（Inner Cell Mass, ICM）

5. 生长特性：贴壁（集落状生长）

6. 细胞形态：圆形或卵圆形集落，细胞核大、胞浆少，呈高折射性

二、细胞特征

1. 形态特征：细胞排列紧密，呈典型的集落状（colony）生长，集落边缘清晰、中心隆起，具有高度折射性；细胞核大，有一个或几个核仁，胞核中多为常染色质，胞浆少，结构简单。

2. 生物学特性：特异性标志物：Oct4（Oct3/4）、Nanog、Sox2、SSEA-1免疫荧光阳性；碱性磷酸酶（AP）染色呈棕红色阳性。

3. 细胞纯度：≥90%

4. 功能特性：具有无限增殖、自我更新和多向分化的潜能，可被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型，包括三个胚层（内胚层、中胚层、外胚层）的衍生细胞。

三、培养条件

1. 专用培养基：含FBS、LIF（白血病抑制因子）、生长添加剂、青霉素、链霉素等培养基（或2i/LIF无血清培养基）

2. 培养环境：37℃，5% CO₂，95%空气，培养箱湿度70%-80%

3. 消化液：0.25%胰蛋白酶或ESGRO Complete Accutase

4. 传代特性：可传3-5代（建议低代次使用）

5. 传代比例：1:2 至 1:4

6. 换液频率：每天换液一次（mESCs对培养条件敏感，需每日观察）

四、主要应用

1. 发育生物学研究：早期胚胎发育机制、细胞命运决定、谱系分化研究。

2. 基因工程与转基因动物：基因打靶、基因敲除/敲入、嵌合体小鼠制备及种系传递研究。

3. 干细胞与再生医学：多能性维持机制、定向分化（神经细胞、心肌细胞、肝细胞等）、细胞替代治疗研究。

4. 药物筛选与毒性评价：新药开发中的细胞模型、化合物毒性测试。

五、产品优势

1. 技术优势：采用囊胚培养法结合免疫外科法或机械剥离法分离内细胞团，经2i/LIF或血清+LIF条件优化培养，确保细胞高 pluripotency。

2. 质量保证：经Oct4、Nanog、Sox2免疫荧光鉴定，纯度≥90%；经检测不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

3. 应用前景：在基因修饰动物模型构建、干细胞基础研究及再生医学领域具有广泛应用价值。

六、培养方法

1. 收货处理：取出T25培养瓶或冻存管，消毒后放入37℃培养箱静置3-4小时（T25瓶）或立即复苏（冻存管）。

2. 培养体系建议：

（1）血清体系：DMEM + 15% FBS + 10³ U/mL LIF + 非必需氨基酸 + 丙酮酸钠 + β-巯基乙醇

（2）2i/LIF无血清体系：N2B27基础培养基 + 3μM CHIR99021 + 1μM PD0325901 + LIF

（3）饲养层准备：建议使用经丝裂霉素C处理或辐照灭活的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）作为饲养层，或选用明胶包被的培养器皿进行无饲养层培养。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行，mESCs对污染极为敏感。

2. 传代时机：集落密度达70%-80%或出现分化迹象时及时传代，避免集落过度生长融合。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长（通常1-2分钟），避免过度消化损伤细胞；建议使用ESGRO Complete Accutase进行温和消化。

4. 密度维持：保持适宜集落生长密度，避免过密导致自发分化或过稀导致生长停滞。

5. 日常观察：每日观察细胞形态，健康mESCs应呈圆顶状、边缘清晰、高折射性集落；若出现扁平化、边缘模糊或分化灶，应及时调整培养条件或进行克隆挑取。

6. 代次控制：强烈建议使用P3-P4代以内的细胞进行实验，长期传代可能导致核型异常和多能性下降。

7. 冻存建议：使用90% FBS + 10% DMSO冻存液，液氮长期保存；建议定期制备低代次种子库。

8. 用途限制：仅限于科研用途，不得用于人体诊断或治疗。